Ribojimo fermentas , taip pat vadinama restrikcijos endonukleazė , baltymas, kurį gamina bakterijos, kurios skilinėja DNR tam tikrose molekulės vietose. Bakterijų ląstelėje restrikcijos fermentai skilti pašalinę DNR, taip pašalindami užkrėstus organizmus. Ribojimo fermentai gali būti išskirti iš bakterijų ląstelių ir naudojami laboratorijoje manipuliuoti DNR fragmentais, pavyzdžiui, turinčiais genus; dėl šios priežasties jie yra nepakeičiami įrankiai rekombinantinės DNR technologijos ( genetinė inžinerija ).
cDNR biblioteka cDNR biblioteka rodo tik genų, kuriuos organizmas koduoja į baltymus, rinkinį. Papildoma DNR arba cDNR yra sukurta atvirkštine transkripcija pasiuntinių RNR, o naudojant DNR klonavimo technologiją sukuriama cDNR biblioteka. „Encyclopædia Britannica, Inc.“
Bakterija naudoja restrikcijos fermentą, kad apsigintų nuo vadinamųjų bakterinių virusų bakteriofagai arba fagai. Kai fagas užkrečia bakteriją, jis įterpia savo DNR į bakterijos ląstelę, kad ji galėtų daugintis. Ribojimo fermentas užkerta kelią fago DNR replikacijai, supjaustydamas ją į daugelį dalių. Ribojantys fermentai buvo įvardyti dėl jų gebėjimo apriboti arba apriboti bakteriofago padermių, galinčių užkrėsti bakteriją, skaičių.
kas yra Airijos sostinė
Kiekvienas restrikcijos fermentas atpažįsta trumpą, specifinę nukleotidų bazių seką (keturis pagrindinius tiesinės dvigrandės DNR molekulės cheminius subvienetus - adeniną, citoziną, timiną ir guaniną). Šie regionai vadinami atpažinimo sekomis arba atpažinimo vietomis ir yra atsitiktinai pasiskirstę po DNR. Skirtingos bakterinės rūšių gaminti restrikcijos fermentus, kurie atpažįsta skirtingas nukleotidų sekas.
Kai restrikcijos endonukleazė atpažįsta seką, ji peršoka DNR molekulę katalizuodama hidrolizė (cheminio ryšio padalijimas pridedant vandens molekulę) ryšys tarp greta nukleotidai. Bakterijos užkerta kelią jų pačių DNR degradacijai tokiu būdu, užmaskuodamos jų atpažinimo sekas. Fermentai, vadinami metilazėmis, prideda metilo grupes (—CH3) adenino arba citozino bazėms atpažinimo sekoje, kuri yra modifikuota ir apsaugota nuo endonukleazės. Restrikcijos fermentas ir jo metilazė sudaryti bakterijų rūšies ribojimo-modifikavimo sistema.
Tradiciškai pripažįstami keturi restrikcijos fermentų tipai, žymimi I, II, III ir IV, kurie pirmiausia skiriasi struktūra, skilimo vieta, specifiškumu ir kofaktoriais. I ir III tipo fermentai yra panašūs tuo, kad tiek restrikcijos, tiek metilazės aktyvumus vykdo vienas didelis fermentų kompleksas, priešingai nei II tipo sistemoje, kurioje restrikcijos fermentas yra nepriklausomas nuo jo metilazės. II tipo restrikcijos fermentai taip pat skiriasi nuo I ir III tipų tuo, kad jie skaido DNR tam tikrose atpažinimo vietos vietose; kiti išskiria DNR atsitiktinai, kartais šimtus bazių iš atpažinimo sekos. Iš įvairių bakterijų rūšių buvo nustatyti keli tūkstančiai II tipo restrikcijos fermentų. Šie fermentai atpažįsta kelis šimtus skirtingų sekų, paprastai nuo keturių iki aštuonių bazių ilgio. IV tipo restrikcijos fermentai skaido tik metilintą DNR ir rodo silpną sekos specifiškumą.
Ribojimo fermentus 1960-ųjų pabaigoje ir 1970-ųjų pradžioje atrado ir apibūdino molekuliniai biologai Werneris Arberis, Hamiltonas O. Smithas ir Danielis Nathansas. Fermentų galimybė pjauti DNR tiksliose vietose leido tyrėjams izoliuoti genų turinčius fragmentus ir rekombinuoti juos su kitomis DNR molekulėmis, t. Y. Klonuoti genus. Ribojimo fermentų pavadinimai yra kilę iš genties, rūšies ir padermės pavadinimai juos gaminančių bakterijų; pavyzdžiui, fermentas Aidas RI gamina Escherichia coli padermė RY13. Manoma, kad restrikcijos fermentai atsirado iš bendro protėvių baltymo ir vystėsi atpažinti specifines sekas per tokius procesus kaip genetinė rekombinacija ir genų amplifikacija.
Copyright © Visos Teisės Saugomos | asayamind.com